保护碱基,保护碱基一般加什么

1、保护碱基

1、添加保护碱基，需要考虑两个因素：一是碱基数目，一是碱基种类。添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的 酶切位点 ，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的，见附表。

2、两侧，在各个酶的两边加上保护碱基。 在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。但实验证明，大多数限制酶对裸露的酶切位点不能切断。

3、由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。

4、因此，在设计同源重组引物时，加入保护碱基是非常必要的。

2、同源重组引物需要加保护碱基吗?

1、最后在引物的5‘端添加酶切位点以及保护碱基。

2、在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点，酶切位点加好后，注意5’端还需要加上保护碱基，这个具体你可以去查下内切酶的说明书。

3、这个一般是构建载体的时候，在引物里面引物酶切位点才会加保护碱基的，这个保护碱基是为了让酶能够正确识别酶切位点，如果你先把PCR连到T载体上再酶切的话，就不用加任何保护碱基都能正确切下来。

3、保护碱基怎么加不至于移码

一般情况下，普通的内切酶只加入两个保护碱基，其内切反应就可以正常进行；而有一类，仅仅只加入两个保护碱基，其内切反应就不能正常进行，这是因为内切酶不能正常结合DNA段上。

由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。

保护碱基直接加到引物酶切位点的5‘端就可以，不同的酶切位点，有不同的保护碱基。

添加保护碱基，需要考虑两个因素：一是碱基数目，一是碱基种类。 　 添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的酶切位点，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的，见附表。

其实加三个就够了，这两个酶又不难切。你们老板一定要加六个的话，随便加三个上去吧，一样的，反正保护性碱基主要目的是提供给酶一个附着位点。

4、不加保护碱基为什么不能酶切

有空的话可以去看一看应该有帮助的。一般来讲，在酶切位点前加入两个GC碱基，因为如果保护碱基为AT的话，保护碱基在PCR产物的末端，AT之间只有两个氢键，结合力差，容易在末端产生单链，这样的话限制性内切酶就无法作用。

其次，在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时，相临的两个酶切位点往往不能同时使用，因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边的酶切位点切割。

一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T，然后按流程操作就可以了。一般是需要转化-验证-测序，如果是构建表达载体的话还有酶切、连接、验证。

5、保护碱基加一侧还是两侧

由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。

保护碱基就是在酶切位点一侧加上的2~5个额外碱基，这样可以提高酶切效率。可以去查保护碱基个数的表。

保护碱基通常是GCGC和GGCC，由于限制位点的掺入，经PCR扩增的靶DNA片断可以方便的克隆到所选的载体分子上，毕竟酶不可能那么精准的识别酶切位点。

保护碱基直接加到引物酶切位点的5‘端就可以，不同的酶切位点，有不同的保护碱基。

要求不是很严格吧，随机添加就可以了，鉴于含有GGCC，可以多加TA。因为基因序列内部的酶切位点，两侧的序列也没有严格的要求，只要Re有停留的位置就可以了，个人觉得。

6、保护碱基的添加原则

1、由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。

2、添加保护碱基的原则 添加保护碱基，需要考虑两个因素：一是碱基数目，一是碱基种类。添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的酶切位点，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的。

3、加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基。

4、添加原则 编辑 添加保护碱基，需要考虑两个因素：一是碱基数目，一是碱基种类。添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的 酶切位点 ，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的，见附表。

5、通常应在5端限制酶位点外再加1-2个保护碱基。(8)引物不与模板结合位点以外的序列互补。所扩增产物本身无稳定的二级结构，以免产生非特异性扩增，影响产量。

6、这个一般是构建载体的时候，在引物里面引物酶切位点才会加保护碱基的，这个保护碱基是为了让酶能够正确识别酶切位点，如果你先把PCR连到T载体上再酶切的话，就不用加任何保护碱基都能正确切下来。